In een eerder project waarbij lokale voedselverwerkingsbedrijven in Thailand werden getest op muggenbeten, bleken de etherische oliën (EO's) van Cyperus rotundus, galangal en kaneel een goede anti-muggenwerking te hebben tegen Aedes aegypti. In een poging om het gebruik van traditioneleinsecticidenOm de bestrijding van resistente muggenpopulaties te verbeteren, had deze studie tot doel de potentiële synergie te identificeren tussen de adulticide werking van ethyleenoxide en de toxiciteit van permethrin voor Aedes aegypti-muggen, inclusief pyrethroïde-resistente en -gevoelige stammen.
Om de chemische samenstelling en dodende werking te evalueren van etherische oliën (EO) gewonnen uit de wortelstokken van C. rotundus en A. galanga en de schors van C. verum tegen de gevoelige stam Muang Chiang Mai (MCM-S) en de resistente stam Pang Mai Dang (PMD-R). Ook werd een bioassay met het EO-permethrinmengsel uitgevoerd op volwassen Aedes-muggen om de synergetische werking ervan te onderzoeken.
Chemische karakterisering met behulp van de GC-MS-analysemethode toonde aan dat 48 verbindingen werden geïdentificeerd in de etherische oliën van C. rotundus, A. galanga en C. verum, goed voor respectievelijk 80,22%, 86,75% en 97,24% van de totale componenten. Cyperene (14,04%), β-bisabolene (18,27%) en cinnamaldehyde (64,66%) zijn de belangrijkste componenten van respectievelijk cyperusolie, galangalolie en balsamico-olie. In biologische dodingsproeven met volwassen insecten bleken de extracellulaire vesikels (EV's) van C. rotundus, A. galanga en C. verum effectief te zijn in het doden van Ae. De LD50-waarden van MCM-S en PMD-R voor Aedes aegypti waren respectievelijk 10,05 en 9,57 μg/mg vrouwtje, 7,97 en 7,94 μg/mg vrouwtje, en 3,30 en 3,22 μg/mg vrouwtje. De effectiviteit van MCM-S en PMD-R bij het doden van volwassen Aedes aegypti in deze etherische oliën lag dicht bij die van piperonylbutoxide (PBO-waarden, LD50 = 6,30 en 4,79 μg/mg vrouwtje, respectievelijk), maar was niet zo uitgesproken als permethrin (LD50-waarden = 0,44 en 3,70 ng/mg vrouwtje, respectievelijk). Combinatietesten toonden echter synergie aan tussen de etherische olie en permethrin. Er werd significante synergie met permethrin waargenomen tegen twee stammen van Aedes-muggen. Aedes aegypti werd waargenomen in de EM van C. rotundus en A. galanga. De toevoeging van oliën van C. rotundus en A. galanga verminderde de LD50-waarden van permethrin op MCM-S significant van respectievelijk 0,44 naar 0,07 ng/mg en 0,11 ng/mg bij vrouwtjes, met synergieratio's (SR) van respectievelijk 6,28 en 4,00. Bovendien verminderden de etherische oliën van C. rotundus en A. galanga ook de LD50-waarden van permethrin op PMD-R significant van respectievelijk 3,70 naar 0,42 ng/mg en 0,003 ng/mg bij vrouwtjes, met SR-waarden van respectievelijk 8,81 en 1233,33.
Synergetisch effect van een combinatie van EO en permethrin om de toxiciteit voor volwassen muggen van twee stammen van het geslacht Aedes te verhogen. Aedes aegypti toont een veelbelovende rol voor ethyleenoxide als synergist bij het verbeteren van de anti-muggenwerking, met name in gevallen waar traditionele middelen niet effectief of ongeschikt zijn.
De Aedes aegypti-mug (Diptera: Culicidae) is de belangrijkste vector van dengue en andere infectieuze virale ziekten zoals gele koorts, chikungunya en het zikavirus, en vormt een enorme en aanhoudende bedreiging voor de mens [1, 2]. Het denguevirus is de ernstigste pathogene hemorragische koorts die mensen treft, met naar schatting 5 tot 100 miljoen gevallen per jaar en meer dan 2,5 miljard mensen wereldwijd die risico lopen [3]. Uitbraken van deze infectieziekte leggen een enorme druk op de bevolking, de gezondheidszorg en de economieën van de meeste tropische landen [1]. Volgens het Thaise ministerie van Volksgezondheid werden er in 2015 landelijk 142.925 gevallen van dengue en 141 sterfgevallen gemeld, meer dan drie keer zoveel als in 2014 [4]. Ondanks historisch bewijs is dengue door de Aedes-mug uitgeroeid of sterk teruggedrongen. Na de bestrijding van Aedes aegypti [5] namen de infectiepercentages dramatisch toe en verspreidde de ziekte zich over de hele wereld, mede door decennia van opwarming van de aarde. Het elimineren en bestrijden van Aedes aegypti is relatief moeilijk omdat het een huishoudelijke mug is die paart, zich voedt, rust en eieren legt in en rond menselijke bewoning gedurende de dag. Bovendien heeft deze mug het vermogen zich aan te passen aan veranderingen in het milieu of verstoringen veroorzaakt door natuurlijke gebeurtenissen (zoals droogte) of menselijke bestrijdingsmaatregelen, en kan ze terugkeren naar haar oorspronkelijke aantallen [6, 7]. Omdat vaccins tegen dengue pas recent zijn goedgekeurd en er geen specifieke behandeling voor dengue bestaat, hangt het voorkomen en verminderen van het risico op dengue-overdracht volledig af van de bestrijding van de muggenvectoren en het elimineren van menselijk contact met de vectoren.
Het gebruik van chemische middelen voor muggenbestrijding speelt tegenwoordig een belangrijke rol in de volksgezondheid als een essentieel onderdeel van een alomvattend, geïntegreerd vectormanagement. De meest populaire chemische methoden omvatten het gebruik van insecticiden met een lage toxiciteit die werken tegen muggenlarven (larviciden) en volwassen muggen (adidociden). Larvenbestrijding door bronreductie en regelmatig gebruik van chemische larviciden zoals organofosfaten en insectengroeiregulatoren wordt als belangrijk beschouwd. De nadelige milieueffecten van synthetische pesticiden en het arbeidsintensieve en complexe onderhoud ervan blijven echter een grote zorg [8, 9]. Traditionele actieve vectorbestrijding, zoals bestrijding van volwassen muggen, blijft de meest effectieve bestrijdingsmethode tijdens virale uitbraken, omdat hiermee infectieziekteverwekkers snel en op grote schaal kunnen worden uitgeroeid, en de levensduur en de levensverwachting van lokale vectorpopulaties kunnen worden verkort [3, 10]. Vier klassen chemische insecticiden: organochloorverbindingen (hierna alleen DDT genoemd), organofosfaten, carbamaten en pyrethroiden vormen de basis van vectorbestrijdingsprogramma's, waarbij pyrethroiden als de meest succesvolle klasse worden beschouwd. Ze zijn zeer effectief tegen verschillende geleedpotigen en hebben een lage effectiviteit en toxiciteit voor zoogdieren. Momenteel vormen synthetische pyrethroiden het grootste deel van de commerciële pesticiden en vertegenwoordigen ze ongeveer 25% van de wereldwijde pesticidenmarkt [11, 12]. Permethrin en deltamethrin zijn breedspectrum pyrethroid insecticiden die al decennialang wereldwijd worden gebruikt om een verscheidenheid aan plagen van agrarisch en medisch belang te bestrijden [13, 14]. In de jaren vijftig werd DDT gekozen als het chemische middel bij uitstek voor het nationale volksgezondheidsprogramma van Thailand ter bestrijding van muggen. Na het wijdverbreide gebruik van DDT in malaria-endemische gebieden, heeft Thailand het gebruik van DDT tussen 1995 en 2000 geleidelijk afgebouwd en vervangen door twee pyrethroiden: permethrin en deltamethrin [15, 16]. Deze pyrethroïde insecticiden werden begin jaren negentig geïntroduceerd voor de bestrijding van malaria en dengue, voornamelijk door middel van behandelingen met klamboes en het gebruik van thermische verneveling en ultra-lage toxiciteitssprays [14, 17]. Ze hebben echter aan effectiviteit ingeboet door sterke resistentie van muggen en een gebrek aan naleving door het publiek vanwege zorgen over de volksgezondheid en de milieueffecten van synthetische chemicaliën. Dit vormt een aanzienlijke uitdaging voor het succes van programma's ter bestrijding van bedreigingsvectoren [14, 18, 19]. Om de strategie effectiever te maken, zijn tijdige en passende tegenmaatregelen nodig. Aanbevolen beheersprocedures omvatten de vervanging van natuurlijke stoffen, rotatie van chemicaliën uit verschillende klassen, toevoeging van synergisten en het mengen van chemicaliën of gelijktijdige toepassing van chemicaliën uit verschillende klassen [14, 20, 21]. Daarom is er dringend behoefte aan het vinden en ontwikkelen van een milieuvriendelijk, handig en effectief alternatief en synergist, en deze studie heeft tot doel aan deze behoefte te voldoen.
Natuurlijk verkregen insecticiden, met name die op basis van plantaardige componenten, hebben potentie getoond bij de evaluatie van huidige en toekomstige alternatieven voor muggenbestrijding [22, 23, 24]. Verschillende studies hebben aangetoond dat het mogelijk is om belangrijke muggenvectoren te bestrijden door plantaardige producten te gebruiken, met name etherische oliën (EO's), als middelen om volwassen muggen te doden. Er zijn volwassendodende eigenschappen gevonden tegen enkele belangrijke muggensoorten in veel plantaardige oliën, zoals selderij, komijn, zedoaria, anijs, pijppeper, tijm, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata en Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30]. Ethyleenoxide wordt tegenwoordig niet alleen op zichzelf gebruikt, maar ook in combinatie met geëxtraheerde plantenstoffen of bestaande synthetische pesticiden, wat leidt tot verschillende toxiciteitsgraden. Combinaties van traditionele insecticiden zoals organofosfaten, carbamaten en pyrethroiden met ethyleenoxide/plantenextracten werken synergetisch of antagonistisch in hun toxische effecten en blijken effectief te zijn tegen ziektevectoren en plagen [31,32,33,34,35]. De meeste studies naar de synergetische toxische effecten van combinaties van fytochemicaliën met of zonder synthetische chemicaliën zijn echter uitgevoerd op landbouwinsecten en plagen, en niet op medisch belangrijke muggen. Bovendien heeft het meeste onderzoek naar de synergetische effecten van combinaties van plantenextracten en synthetische insecticiden tegen muggenvectoren zich gericht op het larvicide effect.
In een eerder onderzoek, uitgevoerd door de auteurs als onderdeel van een lopend onderzoeksproject naar insecticiden uit inheemse voedselplanten in Thailand, werd vastgesteld dat ethyleenoxiden van Cyperus rotundus, galangal en kaneel potentieel werkzaam zijn tegen volwassen Aedes-muggen [36]. Daarom was het doel van deze studie om de effectiviteit te evalueren van etherische oliën die uit deze medicinale planten zijn geïsoleerd tegen Aedes aegypti-muggen, inclusief pyrethroïde-resistente en -gevoelige stammen. Het synergetische effect van binaire mengsels van ethyleenoxide en synthetische pyrethroïden met een goede werkzaamheid bij volwassen muggen is ook geanalyseerd om het gebruik van traditionele insecticiden te verminderen en de resistentie van muggenvectoren te verhogen, met name tegen Aedes aegypti. Dit artikel beschrijft de chemische karakterisering van effectieve etherische oliën en hun potentieel om de toxiciteit van synthetische permethrin tegen Aedes aegypti-muggen te verhogen in pyrethroïde-gevoelige stammen (MCM-S) en resistente stammen (PMD-R).
De wortelstokken van C. rotundus en A. galanga en de schors van C. verum (Fig. 1), gebruikt voor de extractie van etherische olie, werden gekocht bij leveranciers van kruidengeneesmiddelen in de provincie Chiang Mai, Thailand. De wetenschappelijke identificatie van deze planten werd verkregen in overleg met de heer James Franklin Maxwell, herbariumbotanicus, afdeling Biologie, Faculteit Wetenschappen, Chiang Mai Universiteit (CMU), provincie Chiang Mai, Thailand, en wetenschapper Wannari Charoensap, van de afdeling Farmacie, Faculteit Farmacie, Carnegie Mellon Universiteit. Voucher-exemplaren van elke plant worden bewaard op de afdeling Parasitologie van de Faculteit Geneeskunde van Carnegie Mellon Universiteit voor toekomstig gebruik.
Plantmonsters werden afzonderlijk 3-5 dagen in de schaduw gedroogd in een open ruimte met actieve ventilatie en een omgevingstemperatuur van ongeveer 30 ± 5 °C om het vochtgehalte te verwijderen vóór de extractie van natuurlijke etherische oliën (EO's). In totaal werd 250 g van elk gedroogd plantmateriaal mechanisch vermalen tot een grof poeder en gebruikt voor de isolatie van etherische oliën (EO's) door middel van stoomdestillatie. De destillatie-apparatuur bestond uit een elektrische verwarmingsmantel, een rondbodemkolf van 3000 ml, een extractiekolom, een condensor en een Coolace-apparaat (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokio, Japan). Voeg 1600 ml gedestilleerd water en 10-15 glasparels toe aan de kolf en verwarm deze vervolgens tot ongeveer 100 °C met behulp van een elektrische verwarmer gedurende ten minste 3 uur totdat de destillatie voltooid is en er geen EO meer wordt geproduceerd. De EO-laag werd met behulp van een scheidtrechter van de waterfase gescheiden, gedroogd boven watervrij natriumsulfaat (Na2SO4) en bewaard in een afgesloten bruine fles bij 4 °C totdat de chemische samenstelling en de activiteit van de volwassen insecten werden onderzocht.
De chemische samenstelling van de essentiële oliën werd gelijktijdig met de bioassay voor de volwassen stof bepaald. De kwalitatieve analyse werd uitgevoerd met behulp van een GC-MS-systeem bestaande uit een Hewlett-Packard (Wilmington, CA, VS) 7890A gaschromatograaf uitgerust met een enkelvoudige quadrupool massaselectieve detector (Agilent Technologies, Wilmington, CA, VS) en een MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies).
Chromatografische kolom – DB-5MS (30 m × ID 0,25 mm × filmdikte 0,25 µm). De totale GC-MS-looptijd bedroeg 20 minuten. De analyseomstandigheden waren als volgt: de temperatuur van de injector en de transferlijn bedroeg respectievelijk 250 en 280 °C; de oventemperatuur werd ingesteld op een stijging van 10 °C/min van 50 °C naar 250 °C; het draaggas was helium; de stroomsnelheid bedroeg 1,0 ml/min; het injectievolume was 0,2 µL (1/10% volumeprocent in CH2Cl2, splitverhouding 100:1). Voor de GC-MS-detectie werd een elektronenionisatiesysteem met een ionisatie-energie van 70 eV gebruikt. Het acquisitiebereik was 50–550 atomaire massa-eenheden (amu) en de scansnelheid was 2,91 scans per seconde. Relatieve percentages van componenten werden uitgedrukt als percentages genormaliseerd naar piekoppervlakte. De identificatie van EO-ingrediënten is gebaseerd op hun retentie-index (RI). De RI werd berekend met behulp van de vergelijking van Van den Dool en Kratz [37] voor de n-alkanenreeks (C8-C40) en vergeleken met retentie-indices uit de literatuur [38] en bibliotheekdatabases (NIST 2008 en Wiley 8NO8). De identiteit van de weergegeven verbindingen, zoals structuur en molecuulformule, werd bevestigd door vergelijking met beschikbare authentieke monsters.
Analytische standaarden voor synthetisch permethrin en piperonylbutoxide (PBO, positieve controle in synergiestudies) werden aangeschaft bij Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, VS). Testkits voor volwassenen van de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) en diagnostische doses met permethrin geïmpregneerd papier (0,75%) werden commercieel aangeschaft bij het WHO Vector Control Center in Penang, Maleisië. Alle overige gebruikte chemicaliën en reagentia waren van analytische kwaliteit en werden aangeschaft bij lokale instellingen in de provincie Chiang Mai, Thailand.
De muggen die als testorganismen werden gebruikt in de bioassay met volwassen muggen waren vrij parende laboratorium-Aedes aegypti-muggen, waaronder de gevoelige Muang Chiang Mai-stam (MCM-S) en de resistente Pang Mai Dang-stam (PMD-R). Stam MCM-S werd verkregen uit lokale monsters verzameld in het Muang Chiang Mai-gebied, provincie Chiang Mai, Thailand, en wordt sinds 1995 bewaard in de entomologieruimte van de afdeling Parasitologie van de CMU School of Medicine [39]. De PMD-R-stam, die resistent bleek te zijn tegen permethrin, werd geïsoleerd uit veldmuggen die oorspronkelijk waren verzameld in Ban Pang Mai Dang, district Mae Tang, provincie Chiang Mai, Thailand, en wordt sinds 1997 in hetzelfde instituut bewaard [40]. PMD-R-stammen werden gekweekt onder selectieve druk om resistentieniveaus te behouden door intermitterende blootstelling aan 0,75% permethrin met behulp van de WHO-detectiekit met enkele aanpassingen [41]. Elke stam van Ae. Aedes aegypti-larven werden individueel gekweekt in een pathogeenvrij laboratorium bij 25 ± 2 °C en 80 ± 10% relatieve luchtvochtigheid en een licht-donkercyclus van 14:10 uur. Ongeveer 200 larven werden in plastic bakken (33 cm lang, 28 cm breed en 9 cm hoog) gevuld met leidingwater gehouden met een dichtheid van 150-200 larven per bak en tweemaal daags gevoed met gesteriliseerde hondenkoekjes. Volwassen wormen werden in vochtige kooien gehouden en continu gevoed met een 10% waterige sucroseoplossing en een 10% multivitaminesiroopoplossing. Vrouwelijke muggen zuigen regelmatig bloed om eieren te leggen. Vrouwtjes van twee tot vijf dagen oud die nog geen bloed hebben gezogen, kunnen continu worden gebruikt in experimentele biologische testen met volwassen muggen.
Een dosis-mortaliteitsrespons-bioassay van etherische oliën (EO) werd uitgevoerd op volwassen vrouwelijke Aedes-muggen (Aegypti, MCM-S en PMD-R) met behulp van een topische methode, aangepast volgens het WHO-standaardprotocol voor gevoeligheidstesten [42]. De EO van elke plant werd in series verdund met een geschikt oplosmiddel (bijv. ethanol of aceton) om een oplopende reeks van 4-6 concentraties te verkrijgen. Na verdoving met koolstofdioxide (CO2) werden de muggen individueel gewogen. De verdoofde muggen werden vervolgens roerloos op droog filtreerpapier op een speciaal daarvoor ontworpen koelplaat onder een stereomicroscoop gehouden om reactivering tijdens de procedure te voorkomen. Voor elke behandeling werd 0,1 μl EO-oplossing aangebracht op het bovenste pronotum van het vrouwtje met behulp van een Hamilton handmicrodispenser (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, VS). Vijfentwintig vrouwtjes werden behandeld met elke concentratie, waarbij de mortaliteit varieerde van 10% tot 95% voor ten minste 4 verschillende concentraties. Muggen behandeld met oplosmiddel dienden als controle. Om besmetting van de testmonsters te voorkomen, werd het filterpapier voor elke geteste etherische olie vervangen door nieuw filterpapier. De doses die in deze bioassays werden gebruikt, worden uitgedrukt in microgram etherische olie per milligram levend lichaamsgewicht van een vrouwtje. De activiteit van PBO bij volwassen muggen werd op een vergelijkbare manier beoordeeld als bij de etherische olie, waarbij PBO als positieve controle werd gebruikt in synergistische experimenten. Behandelde muggen in alle groepen werden in plastic bekers geplaatst en kregen 10% sucrose plus 10% multivitaminesiroop. Alle bioassays werden uitgevoerd bij 25 ± 2 °C en 80 ± 10% relatieve luchtvochtigheid en viermaal herhaald met controles. De mortaliteit gedurende de 24 uur durende kweekperiode werd gecontroleerd en bevestigd door het ontbreken van een reactie van de mug op mechanische stimulatie en vervolgens geregistreerd op basis van het gemiddelde van vier herhalingen. De experimentele behandelingen werden viermaal herhaald voor elk testmonster met verschillende batches muggen. De resultaten werden samengevat en gebruikt om het sterftepercentage te berekenen, dat vervolgens werd gebruikt om de letale dosis na 24 uur te bepalen met behulp van probitanalyse.
Het synergetische anticidale effect van EO en permethrin werd beoordeeld met behulp van een lokale toxiciteitstestprocedure [42] zoals eerder beschreven. Gebruik aceton of ethanol als oplosmiddel om permethrin in de gewenste concentratie te bereiden, evenals een binair mengsel van EO en permethrin (EO-permethrin: permethrin gemengd met EO in de LD25-concentratie). Testkits (permethrin en EO-permethrin) werden geëvalueerd tegen MCM-S- en PMD-R-stammen van Ae. Aedes aegypti. Aan elk van de 25 vrouwelijke muggen werden vier doses permethrin toegediend om de effectiviteit ervan bij het doden van volwassen muggen te testen, waarbij elke behandeling vier keer werd herhaald. Om potentiële EO-synergisten te identificeren, werden 4 tot 6 doses EO-permethrin toegediend aan elk van de 25 vrouwelijke muggen, waarbij elke toepassing vier keer werd herhaald. De PBO-permethrin-behandeling (permethrin gemengd met de LD25-concentratie van PBO) diende ook als positieve controle. De doses die in deze bioassays werden gebruikt, worden uitgedrukt in nanogram testmonster per milligram levend lichaamsgewicht van een vrouwtje. Vier experimentele evaluaties voor elke muggenstam werden uitgevoerd op afzonderlijk gekweekte batches, en de sterftegegevens werden samengevoegd en geanalyseerd met behulp van Probit om een letale dosis na 24 uur te bepalen.
Het sterftecijfer werd aangepast met behulp van de Abbott-formule [43]. De aangepaste gegevens werden geanalyseerd met behulp van probitregressieanalyse in het computerprogramma SPSS (versie 19.0). Letale waarden van 25%, 50%, 90%, 95% en 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 en LD99) werden berekend met behulp van de corresponderende 95%-betrouwbaarheidsintervallen (95% BI). Significantiemetingen en verschillen tussen testmonsters werden beoordeeld met behulp van de chi-kwadraattoets of de Mann-Whitney U-toets binnen elke biologische test. Resultaten werden als statistisch significant beschouwd bij P < 0,05.< 0,05. De weerstandscoëfficiënt (RR) wordt geschat op het LD50-niveau met behulp van de volgende formule [12]:
RR > 1 duidt op resistentie, en RR ≤ 1 duidt op gevoeligheid. De synergieratio (SR) van elke synergistenkandidaat wordt als volgt berekend [34, 35, 44]:
Deze factor verdeelt de resultaten in drie categorieën: een SR-waarde van 1±0,05 wordt beschouwd als geen merkbaar effect, een SR-waarde van >1,05 wordt beschouwd als een synergetisch effect en een SR-waarde van <1,05 als een synergetisch effect. Een lichtgele vloeibare olie kan worden verkregen door stoomdestillatie van de wortelstokken van C. rotundus en A. galanga en de schors van C. verum. De opbrengsten berekend op droog gewicht waren respectievelijk 0,15%, 0,27% (w/w) en 0,54% (v/v) (Tabel 1). GC-MS-onderzoek naar de chemische samenstelling van de oliën van C. rotundus, A. galanga en C. verum toonde de aanwezigheid aan van respectievelijk 19, 17 en 21 verbindingen, die respectievelijk 80,22%, 86,75% en 97,24% van alle componenten vertegenwoordigden (Tabel 2). De belangrijkste bestanddelen van de olie uit de wortelstok van C. lucidum bestaan uit cyperoneen (14,04%), gevolgd door carraleen (9,57%), α-capsellan (7,97%) en α-capsellan (7,53%). Het belangrijkste chemische bestanddeel van de olie uit de wortelstok van galangal is β-bisabolene (18,27%), gevolgd door α-bergamoteen (16,28%), 1,8-cineol (10,17%) en piperonol (10,09%). Terwijl cinnamaldehyde (64,66%) werd geïdentificeerd als het belangrijkste bestanddeel van de olie uit de schors van C. verum, werden kaneelacetaat (6,61%), α-copaeen (5,83%) en 3-fenylpropionaldehyde (4,09%) als minder belangrijke bestanddelen beschouwd. De chemische structuren van cyperne, β-bisabolene en cinnamaldehyde zijn respectievelijk de belangrijkste verbindingen van C. rotundus, A. galanga en C. verum, zoals weergegeven in Figuur 2.
De resultaten van drie etherische oliën (EO's) die de activiteit van volwassen Aedes-muggen tegen Aedes aegypti beoordeelden, worden weergegeven in Tabel 3. Alle EO's bleken dodelijk te zijn voor Aedes aegypti-muggen bij verschillende typen en doseringen. De meest effectieve EO is C. verum, gevolgd door A. galanga en C. rotundus met LD50-waarden van respectievelijk 3,30, 7,97 en 10,05 μg/mg MCM-S vrouwtjes, iets hoger dan 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) en 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD-R bij vrouwtjes. Dit komt overeen met het feit dat PBO een iets groter effect heeft op volwassen PMD-R dan op de MSM-S-stam, met LD50-waarden van respectievelijk 4,79 en 6,30 μg/mg vrouwtjes (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Er kan worden berekend dat de LD50-waarden van C. verum, A. galanga, C. rotundus en PBO tegen PMD-R respectievelijk ongeveer 0,98, 0,99, 0,95 en 0,76 keer lager zijn dan die tegen MCM-S. Dit duidt er dus op dat de gevoeligheid voor PBO en EO relatief vergelijkbaar is tussen de twee Aedes-stammen. Hoewel PMD-R gevoeliger was dan MCM-S, was de gevoeligheid van Aedes aegypti niet significant. Daarentegen verschilden de twee Aedes-stammen sterk in hun gevoeligheid voor permethrin (Tabel 4). PMD-R vertoonde significante resistentie tegen permethrin (LD50-waarde = 0,44 ng/mg bij vrouwen) met een hogere LD50-waarde van 3,70 vergeleken met MCM-S (LD50-waarde = 0,44 ng/mg bij vrouwen) (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Hoewel PMD-R veel minder gevoelig is voor permethrin dan MCM-S, is de gevoeligheid voor PBO en de oliën van C. verum, A. galanga en C. rotundus iets hoger dan die van MCM-S.
Zoals waargenomen in de bioassay met volwassen muggen van de EO-permethrin-combinatie, vertoonden binaire mengsels van permethrin en EO (LD25) ofwel synergie (SR-waarde > 1,05) ofwel geen effect (SR-waarde = 1 ± 0,05). Complexe effecten van een EO-permethrin-mengsel op experimentele albino-muggen. De Aedes aegypti-stammen MCM-S en PMD-R worden weergegeven in Tabel 4 en Figuur 3. Toevoeging van C. verum-olie bleek de LD50 van permethrin tegen MCM-S licht te verlagen en de LD50 tegen PMD-R licht te verhogen tot respectievelijk 0,44–0,42 ng/mg bij vrouwtjes en van 3,70 tot 3,85 ng/mg bij vrouwtjes. Daarentegen verlaagde de toevoeging van C. rotundus- en A. galanga-olie de LD50 van permethrin op MCM-S significant van 0,44 naar 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) en naar 0,11 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) ng/mg vrouwen. Gebaseerd op de LD50-waarden van MCM-S waren de SR-waarden van het EO-permethrinmengsel na toevoeging van C. rotundus- en A. galanga-olie respectievelijk 6,28 en 4,00. Dientengevolge daalde de LD50 van permethrin tegen PMD-R significant van 3,70 naar 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) en naar 0,003 met de toevoeging van C. rotundus- en A. galanga-olie (U = 0, Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg vrouwelijk. De SR-waarde van permethrin in combinatie met C. rotundus tegen PMD-R was 8,81, terwijl de SR-waarde van het galangal-permethrinmengsel 1233,33 was. Ten opzichte van MCM-S daalde de LD50-waarde van de positieve controle PBO van 0,44 naar 0,26 ng/mg (vrouwtjes) en van 3,70 ng/mg (vrouwtjes) naar 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) en PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). De SR-waarden van het PBO-permethrinmengsel voor de stammen MCM-S en PMD-R waren respectievelijk 1,69 en 5,69. Deze resultaten geven aan dat de oliën van C. rotundus en A. galanga en PBO de toxiciteit van permethrin in grotere mate versterken dan de olie van C. verum voor de stammen MCM-S en PMD-R.
Activiteit (LD50) van etherische oliën (EO), pyrethroïde-oligonucleotiden (PBO), permethrin (PE) en combinaties daarvan tegen pyrethroïde-gevoelige (MCM-S) en -resistente (PMD-R) stammen van Aedes-muggen. Aedes aegypti
[45]. Synthetische pyrethroiden worden wereldwijd gebruikt om bijna alle geleedpotigen van agrarisch en medisch belang te bestrijden. Vanwege de schadelijke gevolgen van het gebruik van synthetische insecticiden, met name de ontwikkeling en wijdverspreide resistentie van muggen, en de impact op de gezondheid en het milieu op de lange termijn, is er echter dringend behoefte aan een vermindering van het gebruik van traditionele synthetische insecticiden en de ontwikkeling van alternatieven [35, 46, 47]. Naast de bescherming van het milieu en de menselijke gezondheid, omvatten de voordelen van botanische insecticiden een hoge selectiviteit, wereldwijde beschikbaarheid en gemakkelijke productie en gebruik, waardoor ze aantrekkelijker zijn voor muggenbestrijding [32, 48, 49]. Deze studie heeft, naast het ophelderen van de chemische kenmerken van effectieve essentiële oliën door middel van GC-MS-analyse, ook de potentie van essentiële oliën van volwassen muggen en hun vermogen om de toxiciteit van synthetische permethrin te versterken, onderzocht. aegypti in pyrethroid-gevoelige stammen (MCM-S) en resistente stammen (PMD-R).
GC-MS-karakterisering toonde aan dat cyperen (14,04%), β-bisabolene (18,27%) en cinnamaldehyde (64,66%) de belangrijkste componenten waren van respectievelijk de oliën van C. rotundus, A. galanga en C. verum. Deze chemicaliën hebben diverse biologische activiteiten aangetoond. Ahn et al. [50] rapporteerden dat 6-acetoxycyperene, geïsoleerd uit de wortelstok van C. rotundus, werkt als een antitumorverbinding en caspase-afhankelijke apoptose kan induceren in eierstokkankercellen. β-Bisabolene, geëxtraheerd uit de etherische olie van de mirreboom, vertoont specifieke cytotoxiciteit tegen menselijke en muizenborstkankercellen, zowel in vitro als in vivo [51]. Er is gerapporteerd dat cinnamaldehyde, verkregen uit natuurlijke extracten of gesynthetiseerd in het laboratorium, insecticide, antibacteriële, schimmelwerende, ontstekingsremmende, immunomodulerende, kankerbestrijdende en anti-angiogene activiteiten bezit [52].
De resultaten van de dosisafhankelijke bioassay met volwassen insecten toonden een goed potentieel van de geteste etherische oliën (EO's) aan en lieten zien dat de Aedes-muggenstammen MCM-S en PMD-R een vergelijkbare gevoeligheid vertoonden voor EO en PBO. Een vergelijking van de effectiviteit van EO en permethrin toonde aan dat de laatste een sterker allercide effect heeft: de LD50-waarden zijn respectievelijk 0,44 en 3,70 ng/mg bij vrouwtjes voor de stammen MCM-S en PMD-R. Deze bevindingen worden ondersteund door vele studies die aantonen dat natuurlijk voorkomende pesticiden, met name producten afkomstig van planten, over het algemeen minder effectief zijn dan synthetische stoffen [31, 34, 35, 53, 54]. Dit kan komen doordat de eerste een complexe combinatie is van actieve of inactieve ingrediënten, terwijl de laatste een gezuiverde, enkelvoudige actieve verbinding is. De diversiteit en complexiteit van natuurlijke actieve ingrediënten met verschillende werkingsmechanismen kunnen echter de biologische activiteit versterken of de ontwikkeling van resistentie in gastheerpopulaties belemmeren [55, 56, 57]. Veel onderzoekers hebben het antimuggenpotentieel van C. verum, A. galanga en C. rotundus en hun componenten zoals β-bisabolene, cinnamaldehyde en 1,8-cineol gerapporteerd [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Een literatuuronderzoek toonde echter aan dat er geen eerdere rapporten zijn over het synergetische effect ervan met permethrin of andere synthetische insecticiden tegen Aedes-muggen. Aedes aegypti.
In deze studie werden significante verschillen in permethrin-gevoeligheid waargenomen tussen de twee Aedes-stammen. Aedes aegypti. MCM-S is gevoelig voor permethrin, terwijl PMD-R veel minder gevoelig is, met een resistentiepercentage van 8,41. Vergeleken met de gevoeligheid van MCM-S is PMD-R minder gevoelig voor permethrin, maar gevoeliger voor etherische olie (EO). Dit biedt een basis voor verder onderzoek gericht op het verhogen van de effectiviteit van permethrin door het te combineren met EO. Een synergetische combinatietest voor effecten op volwassen muggen toonde aan dat binaire mengsels van EO en permethrin de mortaliteit van volwassen Aedes aegypti verminderden of verhoogden. Toevoeging van C. verum-olie verlaagde de LD50 van permethrin tegen MCM-S enigszins, maar verhoogde de LD50 tegen PMD-R enigszins, met SR-waarden van respectievelijk 1,05 en 0,96. Dit wijst erop dat C. verum-olie geen synergetisch of antagonistisch effect heeft op permethrin bij testen op MCM-S en PMD-R. Daarentegen vertoonden C. rotundus- en A. galanga-oliën een significant synergetisch effect door de LD50-waarden van permethrin op MCM-S of PMD-R significant te verlagen. Wanneer permethrin werd gecombineerd met etherische olie van C. rotundus en A. galanga, waren de SR-waarden van het EO-permethrinmengsel voor MCM-S respectievelijk 6,28 en 4,00. Bovendien, wanneer permethrin werd geëvalueerd tegen PMD-R in combinatie met C. rotundus (SR = 8,81) of A. galanga (SR = 1233,33), namen de SR-waarden significant toe. Het is belangrijk op te merken dat zowel C. rotundus als A. galanga de toxiciteit van permethrin tegen PMD-R Ae. aegypti significant verhoogden. Op vergelijkbare wijze bleek PBO de toxiciteit van permethrin te verhogen met SR-waarden van respectievelijk 1,69 en 5,69 voor de stammen MCM-S en PMD-R. Omdat C. rotundus en A. galanga de hoogste SR-waarden hadden, werden zij beschouwd als de beste synergisten in het versterken van de permethrin-toxiciteit op respectievelijk MCM-S en PMD-R.
Uit verschillende eerdere onderzoeken is gebleken dat combinaties van synthetische insecticiden en plantenextracten een synergetisch effect hebben op verschillende muggensoorten. Een larvicide bioassay tegen Anopheles Stephensi, uitgevoerd door Kalayanasundaram en Das [65], toonde aan dat fenthion, een breedspectrum organofosfaat, geassocieerd was met Cleodendron inerme, Pedalium murax en Parthenium hysterophorus. Er werd een significante synergie waargenomen tussen de extracten met een synergetisch effect (SF) van respectievelijk 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 en 2,23. Bij een larvicide screening van 15 mangrovesoorten bleek het petroleumether-extract van mangrovewortels het meest effectief te zijn tegen Culex quinquefasciatus met een LC50-waarde van 25,7 mg/L [66]. Er werd ook gerapporteerd dat het synergetische effect van dit extract en het botanische insecticide pyrethrum de LC50 van pyrethrum tegen C. quinquefasciatus-larven verlaagde van 0,132 mg/L naar 0,107 mg/L. Daarnaast werd in deze studie een SF-berekening van 1,23 gebruikt. 34,35,44]. De gecombineerde effectiviteit van Solanum citron-wortelextract en verschillende synthetische insecticiden (bijv. fenthion, cypermethrin (een synthetisch pyrethroïde) en timethphos (een organofosforlarvicide)) tegen Anopheles-muggen werd geëvalueerd. Stephensi [54] en C. quinquefasciatus [34]. Het gecombineerde gebruik van cypermethrin en petroleumether-extract van gele vruchten vertoonde een synergetisch effect op cypermethrin in alle verhoudingen. De meest effectieve verhouding was de binaire combinatie van 1:1 met LC50- en SF-waarden van respectievelijk 0,0054 ppm en 6,83, ten opzichte van An. Stephen West[54]. Terwijl een binair mengsel van S. xanthocarpum en temephos in een verhouding van 1:1 antagonistisch was (SF = 0,6406), vertoonde de combinatie van S. xanthocarpum en fenthion (1:1) synergistische activiteit tegen C. quinquefasciatus met een SF van 1,3125 [34]. Tong en Blomquist [35] onderzochten de effecten van plantaardig ethyleenoxide op de toxiciteit van carbaryl (een breedspectrumcarbamaat) en permethrin voor Aedes-muggen. Aedes aegypti. De resultaten toonden aan dat ethyleenoxide uit agar, zwarte peper, jeneverbes, helichrysum, sandelhout en sesam de toxiciteit van carbaryl voor Aedes-muggen verhoogde. De SR-waarden voor Aedes aegypti-larven variëren van 1,0 tot 7,0. Daarentegen bleken geen van de etherische oliën toxisch te zijn voor volwassen Aedes-muggen. Tot nu toe zijn er geen synergetische effecten gerapporteerd voor de combinatie van Aedes aegypti en EO-carbaryl. PBO werd gebruikt als positieve controle om de toxiciteit van carbaryl tegen Aedes-muggen te versterken. De SR-waarden voor Aedes aegypti-larven en volwassen muggen zijn respectievelijk 4,9-9,5 en 2,3. Alleen binaire mengsels van permethrin en EO of PBO werden getest op larvicide activiteit. Het EO-permethrin-mengsel had een antagonistisch effect, terwijl het PBO-permethrin-mengsel een synergetisch effect had tegen Aedes-muggenlarven. Dosis-respons-experimenten en SR-evaluatie voor PBO-permethrin-mengsels zijn echter nog niet uitgevoerd. Hoewel er nog weinig onderzoek is gedaan naar de synergetische effecten van combinaties van fytosynthetische stoffen tegen muggen als vectoren, ondersteunen deze gegevens de bestaande resultaten. Dit opent de mogelijkheid om synergisten toe te voegen, niet alleen om de benodigde dosis te verlagen, maar ook om het dodende effect te versterken. Bovendien toonden de resultaten van deze studie voor het eerst aan dat de oliën van C. rotundus en A. galanga synergetisch een significant hogere werkzaamheid vertonen tegen pyrethroïde-gevoelige en pyrethroïde-resistente stammen van Aedes-muggen in vergelijking met PBO, wanneer deze gecombineerd worden met permethrin. De synergetische analyse leverde echter onverwachte resultaten op: de olie van C. verum bleek de grootste anti-volwassen activiteit te hebben tegen beide Aedes-stammen. Verrassend genoeg was het toxische effect van permethrin op Aedes aegypti onbevredigend. Variaties in toxische effecten en synergetische effecten kunnen gedeeltelijk worden toegeschreven aan de blootstelling aan verschillende soorten en concentraties bioactieve componenten in deze oliën.
Ondanks pogingen om te begrijpen hoe de efficiëntie kan worden verbeterd, blijven de synergetische mechanismen onduidelijk. Mogelijke redenen voor de verschillende werkzaamheid en het synergetische potentieel kunnen verschillen in de chemische samenstelling van de geteste producten en verschillen in de vatbaarheid van muggen, gerelateerd aan resistentiestatus en -ontwikkeling, zijn. Er zijn verschillen tussen de belangrijkste en minder belangrijke ethyleenoxidecomponenten die in dit onderzoek zijn getest, en van sommige van deze verbindingen is aangetoond dat ze afstotende en toxische effecten hebben tegen diverse plagen en ziektevectoren [61,62,64,67,68]. De belangrijkste verbindingen die in de oliën van C. rotundus, A. galanga en C. verum zijn gekarakteriseerd, zoals cypern, β-bisabolene en cinnamaldehyde, zijn echter in dit artikel niet getest op hun anti-volwassen en synergetische activiteit tegen respectievelijk Aedes aegypti. Toekomstig onderzoek is daarom nodig om de actieve bestanddelen in elke essentiële olie te isoleren en hun insecticide werkzaamheid en synergetische interacties tegen deze muggenvector op te helderen. Over het algemeen hangt de insecticide werking af van de wisselwerking tussen gifstoffen en insectenweefsels, die vereenvoudigd kan worden tot drie fasen: penetratie in de huid van het insectenlichaam en de membranen van het doelorgaan, activering (= interactie met het doel) en ontgifting van giftige stoffen [57, 69]. Daarom vereist insecticide-synergie, resulterend in een verhoogde effectiviteit van combinaties van giftige stoffen, ten minste één van deze categorieën, zoals verhoogde penetratie, grotere activering van geaccumuleerde verbindingen of minder verminderde ontgifting van het actieve bestanddeel van het pesticide. Energietolerantie vertraagt bijvoorbeeld de penetratie van de cuticula door een verdikte cuticula en biochemische resistentie, zoals een verhoogd insecticidemetabolisme dat wordt waargenomen bij sommige resistente insectenstammen [70, 71]. De significante effectiviteit van etherische oliën bij het verhogen van de toxiciteit van permethrin, met name tegen PMD-R, kan een oplossing bieden voor het probleem van insecticideresistentie door interactie met resistentiemechanismen [57, 69, 70, 71]. Tong en Blomquist [35] ondersteunden de resultaten van deze studie door een synergetische interactie tussen etherische oliën en synthetische pesticiden aan te tonen. PBO is niet alleen een metabolische remmer van cytochroom P450 monooxygenase, maar er is ook bewijs voor remmende activiteit tegen ontgiftende enzymen, waaronder cytochroom P450 monooxygenasen en carboxylesterasen, die nauw verbonden zijn met de ontwikkeling van resistentie tegen traditionele pesticiden. PBO zou niet alleen een metabolische remmer zijn van cytochroom P450 monooxygenase, maar verbetert ook de penetratie van insecticiden, zoals aangetoond door het gebruik ervan als positieve controle in synergistische studies [35, 72]. Interessant is dat 1,8-cineol, een van de belangrijke componenten in galangalolie, bekend staat om zijn toxische effecten op insectensoorten [22, 63, 73] en dat er synergistische effecten zijn gerapporteerd in verschillende gebieden van biologisch activiteitsonderzoek [74, 75, 76, 77]. Bovendien heeft 1,8-cineol in combinatie met verschillende geneesmiddelen, waaronder curcumine [78], 5-fluorouracil [79], mefenaminezuur [80] en zidovudine [81], ook een permeatiebevorderend effect in vitro. De mogelijke rol van 1,8-cineol in synergetische insecticide werking is dus niet alleen die van een actief bestanddeel, maar ook die van een penetratieversterker. Vanwege de grotere synergie met permethrin, met name tegen PMD-R, kunnen de synergetische effecten van galangalolie en trichosanthesolie die in deze studie zijn waargenomen, het gevolg zijn van interacties met resistentiemechanismen, dat wil zeggen een verhoogde permeabiliteit voor chloor. Pyrethroiden verhogen de activering van geaccumuleerde verbindingen en remmen ontgiftende enzymen zoals cytochroom P450-monooxygenasen en carboxylesterasen. Deze aspecten vereisen echter verder onderzoek om de specifieke rol van EO en de geïsoleerde verbindingen ervan (afzonderlijk of in combinatie) in synergetische mechanismen op te helderen.
In 1977 werd een toenemende resistentie tegen permethrin gemeld in belangrijke vectorpopulaties in Thailand, en in de daaropvolgende decennia werd het gebruik van permethrin grotendeels vervangen door andere pyrethroïde chemicaliën, met name die welke deltamethrin hebben vervangen [82]. Vectorresistentie tegen deltamethrin en andere klassen insecticiden komt echter zeer vaak voor in het hele land als gevolg van overmatig en aanhoudend gebruik [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Om dit probleem aan te pakken, wordt aanbevolen om afgedankte pesticiden die voorheen effectief en minder giftig voor zoogdieren waren, zoals permethrin, te rouleren of opnieuw te gebruiken. Hoewel het gebruik van permethrin in recente nationale muggenbestrijdingsprogramma's van de overheid is verminderd, kan resistentie tegen permethrin nog steeds worden aangetroffen in muggenpopulaties. Dit kan te wijten zijn aan blootstelling van muggen aan commerciële huishoudelijke bestrijdingsmiddelen, die voornamelijk bestaan uit permethrin en andere pyrethroïden [14, 17]. Succesvol hergebruik van permethrin vereist daarom de ontwikkeling en implementatie van strategieën om vectorresistentie te verminderen. Hoewel geen van de afzonderlijk geteste essentiële oliën in dit onderzoek zo effectief was als permethrin, resulteerde de combinatie met permethrin in indrukwekkende synergetische effecten. Dit is een veelbelovende aanwijzing dat de interactie van EO met resistentiemechanismen ertoe leidt dat de combinatie van permethrin met EO effectiever is dan het insecticide of de EO afzonderlijk, met name tegen PMD-R Ae. Aedes aegypti. De voordelen van synergetische mengsels in het verhogen van de werkzaamheid, ondanks het gebruik van lagere doses voor vectorbestrijding, kunnen leiden tot een beter resistentiebeheer en lagere kosten [33, 87]. Uit deze resultaten blijkt dat de EO's van A. galanga en C. rotundus significant effectiever waren dan PBO in het synergetisch beïnvloeden van de permethrintoxiciteit in zowel MCM-S als PMD-R stammen en een potentieel alternatief vormen voor traditionele prestatiebevorderende middelen.
De geselecteerde etherische oliën vertoonden significante synergetische effecten bij het versterken van de toxiciteit voor volwassen muggen tegen PMD-resistente Ae. aegypti, met name galangaolie, met een SR-waarde tot 1233,33. Dit wijst erop dat etherische oliën veelbelovend zijn als synergist bij het versterken van de effectiviteit van permethrin. Dit kan het gebruik van een nieuw actief natuurlijk product stimuleren, wat samen kan leiden tot een toename van zeer effectieve muggenbestrijdingsmiddelen. Het toont ook het potentieel van ethyleenoxide als alternatieve synergist aan om oudere of traditionele insecticiden effectief te verbeteren en bestaande resistentieproblemen in muggenpopulaties aan te pakken. Het gebruik van gemakkelijk verkrijgbare planten in muggenbestrijdingsprogramma's vermindert niet alleen de afhankelijkheid van geïmporteerde en dure materialen, maar stimuleert ook lokale inspanningen om de volksgezondheidssystemen te versterken.
Deze resultaten tonen duidelijk het significante synergetische effect aan dat wordt geproduceerd door de combinatie van ethyleenoxide en permethrin. De resultaten benadrukken het potentieel van ethyleenoxide als plantensynergist bij de bestrijding van muggen, waardoor de effectiviteit van permethrin tegen muggen, met name in resistente populaties, wordt verhoogd. Toekomstige ontwikkelingen en onderzoek vereisen synergetische bioanalyse van galangal- en alpinia-olie en hun geïsoleerde verbindingen, combinaties van insecticiden van natuurlijke of synthetische oorsprong tegen meerdere soorten en stadia van muggen, en toxiciteitstesten tegen niet-doelorganismen. Praktisch gebruik van ethyleenoxide als een levensvatbaar alternatief synergist.
Wereldgezondheidsorganisatie. Mondiale strategie voor de preventie en bestrijding van dengue 2012-2020. Genève: Wereldgezondheidsorganisatie, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Zika-virus: geschiedenis, opkomst, biologie en controlevooruitzichten. Antiviraal onderzoek. 2016; 130: 69–80.
Wereldgezondheidsorganisatie. Dengue-feitenblad. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Geraadpleegd op: 20 januari 2017
Ministerie van Volksgezondheid. Huidige status van gevallen van dengue en dengue hemorragische koorts in Thailand. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Geraadpleegd op: 6 januari 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 jaar denguepreventie en vectorbestrijding in Singapore. Sudden infectious disease. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Uitdagingen identificeren en oplossingen voorstellen voor de bestrijding van Aedes aegypti-virusvectoren. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centers for Disease Control and Prevention. Denguekoorts, entomologie en ecologie. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Geraadpleegd op: 6 januari 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Vergelijking van de larvicide activiteit van bladeren, schors, stengels en wortels van Jatropa curcas (Euphorbiaceae) tegen de malariamug Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Habitatkenmerken van Anopheles-larven in malariagebieden van het malaria-uitroeiingsprogramma in Zuidoost-Iran. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Overzicht van benaderingen voor vectorbestrijding, preventie en bestrijding van uitbraken van het West-Nijl-virus, en de uitdagingen waar Europa voor staat. Parasites vector. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selectie en moleculaire mechanismen van cypermethrinresistentie bij rode rupsen (Amsacta albistriga Walker). Biochemische fysiologie van plagen. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Laboratoriumonderzoek naar permethrinresistentie en kruisresistentie van Culex quinquefasciatus tegen andere insecticiden. Palastor Research Center. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Pesticidechemie: Menselijk welzijn en milieu, deel 3: Werkingsmechanisme, metabolisme en toxicologie. New York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Een overzicht van insecticideresistentie en gedragsvermijding van ziektevectoren bij de mens in Thailand. Parasites vector. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Huidige patronen van insecticideresistentie onder muggenvectoren in Thailand. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. De status van malaria in Thailand. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Tijdelijke frequentie van de F1534C- en V1016G-knockdown-resistentiemutaties in Aedes aegypti-muggen in Chiang Mai, Thailand, en de impact van mutaties op de effectiviteit van thermische nevelsprays met pyrethroiden. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Insecticideresistentie in de belangrijkste dengue-vectoren Aedes albopictus en Aedes aegypti. Biochemische fysiologie van plagen. 2012; 104: 126–31.
Geplaatst op: 8 juli 2024